4 标本采集与微量全血培养

4.1 主要仪器和试剂配制主要仪器和试剂配制参见附录A。

4.2 外周静脉血采集采集静脉血约2 mL，肝素抗凝，颠倒混匀，静脉血保存最佳温度是18 ℃～24 ℃，72 h内送达实验室。

4.3 微量全血培养步骤

4.3.1 将采集的静脉血 0.3 mL～0.5mL 加入 4mL～5 mL 含植物血凝素和 10%～20%胎牛血清的洛斯维帕克纪念研究所-1640（RPMI-1640）培养基中，在培养容器上编号并注明培养开始时间和日期，轻轻摇匀，37 ℃±0.5 ℃恒温培养。

4.3.2 如采用常规培养微核法，培养至 68 h～72 h 收获细胞。

4.3.3 如采用胞质分裂阻断微核法，培养至 40 h～44 h，加入松胞素-B，使其终浓度为 6 μg/mL，继续培养至 72 h 收获细胞。

5 微核标本制备

5.1 低渗吸弃培养液上清，摇匀，每管加入4 mL 37℃预温的KCl低渗液（常规培养法低渗液浓度宜为0.075mol/L，CB微核法低渗液浓度宜为0.1 mol/L），轻轻吹打均匀，立即加入新配制的固定液0.5 mL～1 mL（甲醇：冰醋酸体积比3：1），混匀，移至10 mL～15 mL离心管中，水平离心机离心8 min～10 min，离心力为200 g～250 g。

5.2 固定弃上清，摇匀，加入4.5 mL固定液，固定20 min～30 min，水平离心机离心8 min～10 min，离心力为200 g～250 g。离心后可用固定液洗涤细胞，以减少细胞悬液中的杂质。

5.3 制片弃上清，视细胞数量酌情加入固定液数滴，充分混匀，将细胞悬液均匀滴在洁净干燥载玻片上，室温干燥。

5.4 编号对每一张微核标本玻片进行编号，并做好记录。

5.5 染色用体积比为8%～10%的瑞氏-吉姆萨染液或吉姆萨染液染色8 min～10 min，轻轻冲洗，室温干燥。